使用 Lumicounter 的抗氧化作用测量方法
使用 Lumicounter 的抗氧化作用测量方法
通过呼吸作用进入体内的大约 3% 的氧气在电子传递链的能量代谢过程中被还原为超氧阴离子 (O2-)、过氧化氢 (H2O2)、羟基自由基 (.OH) 和单线态氧 (1O2) 和其他活性氧。已经指出，这些活性氧使蛋白质变性并破坏DNA中的抗癌基因，从而引起癌变。
另一方面，人体有清除活性和抗氧化物质，如抗坏血酸和α-生育酚等，如超氧化物歧化酶（SOD）氧可将氧气清除。近年来，寻找具有抗氧化能力的物质，如儿茶素和异黄酮等多酚类物质，以及作为它们的辅助物质的物质受到关注，并且正在进行对其能力的分析。在这里，我们总结了使用化学发光测量自由基清除能力的方法作为抗氧化能力的测量方法。
图1 活性氧的产生与去除
原则
化学发光法
化学发光是由发光底物的氧化引起的。使用金属离子或铁等络合物作为催化剂，鲁米诺被 H2O2 氧化，形成 3-氨基邻苯二甲酸。此时首先成为激发单重态，成为基态后发出蓝色光。
鲁米诺反应
抗氧化能力评价
通过测量发光底物的目标物质对发光的氧化抑制，可以测量目标物质的抗氧化能力。作为抗氧化能力的指标，有一种方法可以检查酶反应产生的自由基的自由基清除能力。另外，在ESR（电子自旋共振）方法中，产生的自由基被DMPO捕获并测量为自由基强度。因此，间接追踪超氧化物的消除，而发光测量直接测量活性氧裂解时产生的发光，因此可以说是一种更直接的测量方法。
次黄嘌-黄嘌氧化酶-O2-的底物，是酶促反应产生的一种活性氧，用鲁米诺、光泽精或Cypridina荧光素衍生物等使之发光，用发光量计测定发光量。发光计数器。此时计算抑制率（抑制率（%）=1-B/A×100），其中A为未添加抗氧剂时的发光量，B为添加抗氧剂时的发光量. 可以推断，抑制率越高，抗氧化效果越高。另外，根据SOD的抑制率，将每单位重量样品的抑制率换算成等量的SOD，可以进行定量测定。
图2 抗氧化作用测量原理
次黄嘌0-黄嘌0氧化酶系统中的 O2- 产生
抗氧化能力测定例
O2- 由次黄嘌0-黄嘌0氧化酶反应产生，并使用发光试剂发光。添加抗氧化剂作为样品并获得抑制率。
■ 试剂
KH2PO4 缓冲液 (0.1M-KH2PO4-0.05mM-EDTA)
次黄嘌0溶液（3.6mM-次黄嘌0/KH2PO4 缓冲液）
黄嘌0氧化酶溶液（100μg/mL-黄嘌0氧化酶溶液）
发光试剂
■ 测量
使用 Lumicounter 进行测量。由于是高灵敏度的微弱光测量仪，请避开窗户等有直射光的地方，并注意湿度。NU-700 可以在微型管中进行测量。此外，NU-2500具有搅拌功能，通过每隔一定时间反转并稍微偏离旋转轴中心的搅拌装置，即可有效搅拌样品。
图 3 Lumicounter NU-2500
(A)未添加抗氧化剂的微管
发光试剂
黄嘌0氧化酶溶液
KH2PO4缓冲剂
被分配并设置在设备中。从自动移液器中分装黄嘌0溶液并测量积分发光值一分钟。
(B)添加到微管中的抗氧化剂
发光试剂
抗氧化剂
黄嘌0氧化酶溶液
KH2PO4缓冲剂
被分配并设置在设备中。从自动移液器中分装黄嘌0溶液并测量积分发光值一分钟。
应用领域
抗氧化能力测量和活性氧测量用于以下领域。
新型功能性食品的研发
水稻过氧化物酶活性的测定 稗子中 自由基
清除成分的测定
过氧化氢对发芽 生根的影响医学领域
活性氧在体内作用机制的阐明
体内氧化应激
的测量 灌注系统中NO的测量 肝损伤
枯否细胞 的活性氧生产能力分析化学
发光试剂的开发
测量方法的开发
分子探针的开发其他
光催化反应产生的活性氧的测量
鱼类中性粒细胞活性氧产生能力的比较鱼种间牛乳腺炎
化学发光早期诊断
除了测量活性氧之外， Lumicounter还可用于多种用途，例如以下用途。
使用报告基因的分析使用
报告基因的基因转录和表达功能分析（启动子、增强子等的活性分析）1. 荧光素酶测定
2. 使用磷酸酶
进行分析 3. 使用 β-半乳糖苷酶进行分析通过 ATP 测量测量细菌和细胞计数
1. 食品、废水、土壤等中生物量的测量
2. 食品工业工作场所的卫生检查
3.通过测量细胞中的ATP来调查细胞活性
4. 细菌和酵母等微生物的细胞计数测量
5.种子、植物生长率测定等NAD(P)H系统发光信号的测量与分析
来自发光细菌的荧光素酶在存在下催化还原的黄素单核苷酸和6-8个碳链的长链醛氧化成长链脂肪酸的反应酶。发光发生。1. NAD(P)H 定量
2. FMN 定量
3. 酶联免疫分析应用化学发光
鲁米诺、光泽精等化学发光。1.化学发光法检测吞噬活性2.
水母蛋白测定Ca2+浓度3.化学
发光法定量Ach（乙酰胆碱）等
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